Orientador(es): ANDREA FURTADO MACEDO
Área temática: BIODIVERSIDADE
Modalidade de apresentação: SESSÃO ORAL
Bolsa: PIBIC
A cultura in vitro é fundamental para estudar o desenvolvimento das plantas, permitindo a manipulação de fatores que afetam sua morfogênese e fisiologia (Thorpe, 2007). No gênero Vanilla, além da escarificação química e do uso de sementes imaturas, alguns reguladores de crescimento auxiliam na germinação e formação de protocormos essenciais para propagação e conservação da espécie (Parismoreno-Rivas et al., 2024). Paralelamente, a extração enzimática e etanólica de frutos maduros possibilita obter compostos bioativos essenciais para estudos e análises por LC-MS. O objetivo deste estudo é avaliar o efeito da 6-benzilaminopurina (BAP) como regulador de crescimento no desenvolvimento in vitro de plântulas de V. cribbiana e realizar extrações enzimáticas e etanólicas de frutos de cinco espécies do gênero para análises químicas. Para o cultivo in vitro foram preparados meios do tipo MS completos e com redução de sais nitrogenados (1/4 do usual); (Pedroso-de-Moraes et al., 2012), com vitaminas, ágar (8,75 g/L), sacarose (30g/L) e carvão ativado (2 g/L). BAP foi adicionado em duas concentrações (4,44 µM e 8,88 µM) aos meios para investigar seus efeitos sobre o crescimento de protocormos. Estes foram inoculados em frascos numa Câmara de Fluxo Laminar Horizontal, quatro protocormos por frasco, com cinco frascos por tratamento (total de 120 protocormos) e medido quinzenalmente com paquímetro, avaliando altura, largura e cor. Para as extrações, os frutos de V. planifolia e V. bahiana foram coletados no Jardim Botânico do Rio de Janeiro e na APA de Maricá, respectivamente, os de V. pompona e V. cribbiana foram adquiridos de produtores do Peru e de Belmonte (BA), respectivamente e os de V. odorata de produtores do Equador. Cerca de 10g de frutos liofilizados de cada espécie foram triturados em N2 líquido até a obtenção de pó homogêneo. As amostras foram submetidas à extração enzimática, solubilizadas em solução tampão citrato-fosfato (0,05M; pH 5) e solução enzimática de ß-glicosidase de amêndoas (1mg/mL) e incubadas em banho-seco com agitação (4h, 37ºC, 350 rpm). Os extratos foram liofilizados e macerados em solução aquosa de álcool de cereais (50%, v/v) na proporção de 1:10 (amostra:solvente) por 14 dias. Foram agitados, filtrados e armazenados a -18ºC. Realizou-se também extrações enzimáticas de frutos de V. odorata conforme o método descrito acima. Para a extração etanólica foram adicionados 5 mL de Etanol (HPLC) às amostras, que foram vortexadas, submetidas ao ultrasonicador de probe e centrifugadas (4ºC; 10 min; 10.000 x g). Este procedimento foi repetido mais duas vezes, reservando o sobrenadante e adicionando 1 mL de etanol a cada ciclo. Os extratos obtidos neste trabalho foram armazenados a -80ºC para análises posteriores (HPLC). Durante o curto período experimental não houve desenvolvimento significativo dos protocormos, que oxidaram a partir da terceira semana, contudo, este trabalho possibilitou o aprimoramento acadêmico e profissional do pesquisador em técnicas de biotecnologia vegetal.
PARISMORENO-RIVAS L et al. Effect of different concentrations of benzylaminopurine for the in vitro propagation of Vanilla tahitensis. Mexican Journal of Biotechnology, 2024. PEDROSO-DE-MORAES, C.; SOUZA-LEAL, T. de; PANOSSO, A. R.; SOUZA, M. C. de. Efeitos da escarificação química e da concentração de nitrogênio sobre a germinação e o desenvolvimento in vitro de Vanilla planifolia Jack ex Andr. (Orchidaceae: Vanilloideae). Acta Botanica Brasilica, v. 26, n. 3, p. 714–719, 2012. THORPE, T. A. (2007). History of Plant Tissue Culture. Molecular Biotechnology, 37(2), 169-180.